Como identificar bastonetes Gram positivos

Desde a década de 1880 , o teste de coloração de Gram continua a ser um importante método de identificação e classificação bacteriana . Microbiologistas frequentemente realizar o teste de Gram quanto a primeira etapa na identificação de tipos particulares de bactérias em forma de bastonete, a partir do género Bacillus . A coloração de Gram é nomeado para seu inventor, bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram. A técnica funciona por causa da diferença em gramas fisiologia da parede celular bacteriana positivas e Gram negativas . Certain bastonetes Gram positivos causar doenças graves, como o antraz ea tetanus.Things Você vai precisar de
roupas Lab
Luvas
revestimentos Calçados
panela de pressão
bactérias colônia
Agar
Petri pratos
Water Fotografia de inoculação laço
lâmina de vidro
Metanol
bico de Bunsen
cristal mancha violeta
reagente mancha de iodo
Decolorizer
Safranin
solução Fucsina
papel absorvente
microscópio
Mostrar Mais instruções
1

Proteger o uso de um espaço limpo laboratório asséptica para realizar o teste de coloração de Gram . Usar vestuário de laboratório e de calçados revestimentos limpos para evitar a contaminação . Use luvas e uma máscara ao manusear culturas bacterianas . Isolar uma colônia de bacilos para o teste e cultivá-la para fora em agar rico em nutrientes em placas de petri . Esterilizar as placas de Petri e agar com uma panela de pressão antes de usar.
2

Adicione algumas gotas de água limpa para a placa de cultura . Distribuí-lo uniformemente sobre o ágar. Arraste uma alça de inoculação levemente em toda a superfície do ágar. Transfira a amostra sobre uma lamela de vidro limpa e esfregaço uniformemente na área circular do tamanho de uma moeda . Manter o tamanho da amostra mínima ; você deve ser apenas capaz de vê-lo a olho nu .
3

Aplicar 95 por cento de metanol sobre a mancha de slides por dois minutos para fixar as células e evitar distorções de sua morfologia . Air secar o slide ou aquecê-lo suavemente sobre um baixo bico de Bunsen chama. Mova o controle deslizante para trás e para a frente para o calor uniformemente e evitar localizados os pontos críticos. Aplicar o calor de maneira uniforme e consistente. Evite tomar o slide para fora da chama até que você terminar de aquecê-lo .
4

Despeje reagente de coloração de cristal violeta sobre a lâmina fixa. Deixe descansar por 30 a 60 segundos . Lavar a mancha com água da torneira durante alguns segundos . Escorra o excesso de água a partir do slide. Cobrir a lâmina com reagente de coloração de iodo por 30 a 60 segundos. Lavar o iodo com água da torneira . Incline a lâmina e adicionar algumas gotas de descolorante . Aplique-o até que o segundo turno está limpo. Lave o slide.
5

Mergulhe a lâmina com rosa cor de reagente contra- coloração de safranina durante 30 segundos. Você pode substituir solução básica fuchsin pela safranina . Delicadamente, lave o slide e sacudir o excesso de água. Seque -o secar com papel absorvente e , em seguida, deixe secar o slide. Examine a lâmina preparada sob um microscópio equipado com uma fonte de luz. Procure e identificar bactérias gram positivas hastes com coloração azul ou violeta do teste de coloração de Gram .