Como solucionar um Primer Dimer

A reação em cadeia da polimerase , ou PCR , é uma técnica de biologia molecular usado para amplificar regiões específicas do DNA. A PCR é dependente de iniciadores , que são cadeias curtas de ADN que são complementares e específico para o ADN de interesse . Enquanto primers geralmente vai ligar ao DNA correspondente a sua sequência , eles ocasionalmente se ligará e amplificar o outro, causando o fenômeno conhecido como um dimer.Things primers que você precisa
As sequências dos iniciadores
Mostrar Mais instruções
1

Examinar o conteúdo GC (número de G e C do ) em sua seqüência de primer. Ligação GC é mais forte que AT ligação por causa da ligação de hidrogênio adicional entre a guanina e citosina . Ligação ideal é pelo menos 50 por cento de conteúdo GC .
2

Examinar a temperatura de recozimento de sua reação . As baixas temperaturas de recozimento, em geral, definido como 55 C ou abaixo , podem causar a ligação não específica do iniciador , o que pode causar dímeros de iniciadores de amplificação , para além de secções genómicas incorrectas .
3

Duplo -check a quantidade e concentração de primers que você adicionou à PCR. Um excesso de primers , geralmente mais de 75 picomoles , pode causar dímeros de primers , também.