Como preparar uma gota de suspensão

Para determinar a estrutura 3D de uma proteína , você precisa primeiro de um cristal puro do mesmo. O método de gota suspensa de usa uma gota de solução contendo proteína de suspensão de uma lamela. Abaixo desta encontra-se uma gota em suspensão reservatório com uma concentração de sal mais elevada do que a da gota . Ao longo do tempo , o vapor de água sai da gota e termina no reservatório , fazendo com que a proteína se cristalizar . Cada proteína requer diferentes condições (como a concentração de sal e pH ) , e muitas vezes tentativa e erro oferece a única maneira de encontrar as conditions.Things direito que você vai precisar
jaleco, luvas e proteção para os olhos
Micropipeta com pipeta dicas
uma solução molar de cloreto de sódio em tampão de acetato de 0,05 molar , pH 4,7
2 mL tubos Eppendorf ( ou semelhante )
Centrífuga
de 24 poços da placa de vácuo
graxa em seringa
siliconizadas lamela
ar comprimido
Pinças
clay ( eg massa de modelar ou similar)
50 mg /mL de lisozima em solução tampão acetato 0,05 molar , pH 4,7
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1

colocar equipamentos de laboratório ( casaco, luvas e proteção para os olhos ) .
2

Use uma micropipeta para adicionar 1,1 mL de cloreto de sódio ( sal) e solução tampão acetato em um tubo de Eppendorf .
3

Centrífuga tubo Eppendorf fechado com a solução salina em seu interior por cerca de cinco minutos a 13.000 rpm. Lembrar para equilibrar a centrífuga , colocando um outro tubo Eppendorf , contendo 1,1 ml de água através de e em frente ao tubo de solução de sal .
4

Adicionar 1 ml de solução de sal a um poço numa 24 poços placa .
5

Use uma seringa cheia de graxa para colocar uma fina camada de graxa ao redor da borda deste bem . Tome cuidado para não adicionar muito pouco ou demais. Se você adicionar muita gordura , a gordura vai correr para dentro do poço e, possivelmente, arruinar a sua experiência. Se você usa muito pouco, o bem não vai ser hermético e sua experiência não vai funcionar. Apontar para graxa apenas o suficiente para que a lamela e graxa formar uma vedação hermética mais tarde.
6

Passe o barro com as mãos para fazer quatro pequenas bolas , e empurrá-los para os quatro cantos do de 24 bem placa . Eles vão atuar como suporte para garantir a cobertura da placa não entra em contato com a lamela.
7

Use ar comprimido para soprar a poeira fora da lamela. Segurar a lamela com um par de pinças limpas .
8

sugam até 4 microlitros da solução de lisozima com a micropipeta , e adicionar esta solução ao centro da lamela . Mudar as pontas das pipetas , e adicionar 4 microlitros da solução de sal . Pipeta suavemente para cima e para baixo , aspirando fluido depois expelindo-a , para misturar a solução com o sal de solução de lisozima . Tome o cuidado de misturar os dois , sem dispersar o fluido em todo o lamela.
9

Desligue a lamela sobre rapidamente para o líquido não escorregar , e plantá-la diretamente no topo do poço. Tome cuidado para pressionar suavemente sobre ela de modo que forma uma vedação hermética com a graxa ao redor das bordas do bem .
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Empurre a tampa da placa de 24 poços para as bolas de argila , e deixar a placa em um lugar fresco .